working.genome <- "mm10"
umi.cutoff <- 200
data.path <- "/Users/heustonef/Desktop/10XGenomicsData/msAggr_scRNASeq/IndividualPops/"
cell.pop <- "CMP"
seurat.var.pct <- 90
n.neighbors <- 20
# Setting a seed to ensure reproducible data
seed.value <- 10
seurat.rds <- paste0(cell.pop, "Subpop_pctVar", seurat.var.pct, ".RDS")
projectName <- paste0(cell.pop, "Subpop_monocle" )
set.seed(seed.value)
source("~/Desktop/10XGenomicsData/msAggr_scRNASeq/RFunctions/ColorPalette.R")
sessionInfo.filename <- paste0(projectName, "_sessionInfo.txt")
sink(sessionInfo.filename)
sessionInfo()
sink()
After messing with this a bit, I’ve decided the easiest thing to do is integrate the data from the seurat object. This object already has the metadata and gene_short_names that I will need, and based on monocle3 documentation may be the easiest way to make sure everything gets where it needs to be.
library(Seurat)
Registered S3 methods overwritten by 'htmltools':
method from
print.html tools:rstudio
print.shiny.tag tools:rstudio
print.shiny.tag.list tools:rstudio
Registered S3 method overwritten by 'data.table':
method from
print.data.table
Registered S3 method overwritten by 'htmlwidgets':
method from
print.htmlwidget tools:rstudio
Attaching SeuratObject
Attaching package: ‘Seurat’
The following object is masked from ‘package:SummarizedExperiment’:
Assays
seurat.object <- readRDS(file.path(data.path, seurat.rds))
seurat.xprsn <- GetAssayData(seurat.object, slot = "counts", assay = "RNA")
cell_metadata <- seurat.object@meta.data[colnames(seurat.xprsn),]
gene_metadata <- data.frame(gene_short_name = rownames(seurat.xprsn))
rownames(gene_metadata) <- rownames(seurat.xprsn)
cds <- new_cell_data_set(expression_data = seurat.xprsn,
cell_metadata = cell_metadata[colnames(seurat.xprsn), ],
gene_metadata = gene_metadata)
rm(seurat.object, seurat.xprsn, cell_metadata, gene_metadata)
Look at object
cds
class: cell_data_set
dim: 16278 12059
metadata(1): cds_version
assays(1): counts
rownames(16278): Mrpl15 Lypla1 ... CAAA01147332.1 AC149090.1
rowData names(1): gene_short_name
colnames(12059): CMPm2_AAACATACAAGCCT-1 CMPm2_AAACATACACCCTC-1 ... CMPm2_TTTGCATGCTATTC-1
CMPm2_TTTGCATGTGTCCC-1
colData names(11): orig.ident nCount_RNA ... RNA_snn_res.2.5 Size_Factor
reducedDimNames(0):
mainExpName: NULL
altExpNames(0):
saveRDS(cds, file = paste0(projectName, ".RDS"))
cds <- readRDS(paste0(projectName, ".RDS"))
cds <- preprocess_cds(cds = cds, metcdshod = "PCA", num_dim = 50, verbose = TRUE)
Remove noise by PCA ...
plot_pc_variance_explained(cds) + ggtitle("Proportion of variance explained (note not stdev)")
pct.list <- c(80, 85, 90, 95)
for (pct in pct.list){
print(paste("Num pcs for", pct, "variance:", length(which(cumsum(cds@preprocess_aux$prop_var_expl*100) <= pct))))
}
[1] "Num pcs for 80 variance: 23"
[1] "Num pcs for 85 variance: 29"
[1] "Num pcs for 90 variance: 36"
[1] "Num pcs for 95 variance: 43"
UMAP is based on uwot’s umap function
cds <- reduce_dimension(cds = cds, max_components = 2, reduction_method = "UMAP", preprocess_method = "PCA", umap.n_neighbors = n.neighbors)
plot umap. Can color cells based on any colData(cds) column (essentially metadata columns)
plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP", color_cells_by = "RNA_snn_res.1", show_trajectory_graph = FALSE, cell_size = .7, group_label_size = 5) + scale_color_manual(values = color.palette)
Note that this is stored in a different slot than UMAP and will not overwrite those data
cds <- reduce_dimension(cds = cds, max_components = 2, reduction_method = "tSNE", preprocess_method = "PCA")
Plot tSNE. Must specifiy slot to plot
plot_cells(cds = cds, reduction_method = "tSNE", color_cells_by = "RNA_snn_res.1", show_trajectory_graph = FALSE, cell_size = .7, group_label_size = 5) + scale_color_manual(values = color.palette)
saveRDS(cds, file = paste0(projectName, ".RDS"))
Function align_cds tries to remove batch effects using mutual nearest neighbor alignment (package batchelor, Aaron Lun). Will test this on a different object.
Can specify alignment variable using parameter alignment_group. Note that only 1 variable can be specified
# cds.aligned <- align_cds(cds = cds, preprocess_method = "PCA", alignment_group = "nCount_RNA")
Failboat. Requires too much memory on laptop. ### Perform clustering analysis Monocle uses “community detection” (Leiden method and Louvain method).
Note that setting resolution = NULL and cluster_method = "leiden", then resoltuion is determined automatically (actually I think it’s just set to 0.0001, based on code)…
# read RDS
cds <- readRDS(file = paset0(projectName, ".RDS"))
res.list <- c(1e-4, 5e-4, 1e-3, 5e-3)
# reduction.method <- "UMAP"
# cluster.method <- "leiden"
for(res in res.list){
# Cluster cells at given resolution
cds <- cluster_cells(cds = cds,
reduction_method = "UMAP",
k = n.neighbors,
cluster_method = "leiden",
resolution = res,
num_iter = 10,
random_seed = seed.value,
verbose = TRUE)
# Copy cluster information to metadata in colData
coldata.res <- paste0("umap_res_", res)
colData(cds)[coldata.res] <- clusters(cds)
}
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 12059 rows and 2 columns
-k is set to 20
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0500000000001819s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time: 0.00600000000031287s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE. Run time: 0.0739999999996144s
Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 1e-04
leiden_find_partition: num_iter 10
leiden_find_partition: initial_membership 0
leiden_find_partition: edge_weights 0
leiden_find_partition: node_sizes 0
leiden_find_partition: number vertices 12059
leiden_find_partition: number edges 241180
Current resolution is 1e-04; Modularity is 0.765915839716482; Quality is 476834.8874; Significance is 199715.956476619; Number of clusters is 6
Done. Run time: 0.537866115570068s
Clustering statistics
Cell counts by cluster
Maximal modularity is 0.765915839716482 for resolution parameter 1e-04
Run kNN based graph clustering DONE.
-Number of clusters: 6
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 12059 rows and 2 columns
-k is set to 20
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.056999999999789s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time: 0.00700000000006185s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE. Run time: 0.0630000000001019s
Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 5e-04
leiden_find_partition: num_iter 10
leiden_find_partition: initial_membership 0
leiden_find_partition: edge_weights 0
leiden_find_partition: node_sizes 0
leiden_find_partition: number vertices 12059
leiden_find_partition: number edges 241180
Current resolution is 5e-04; Modularity is 0.89291159966731; Quality is 468670.909; Significance is 363006.081410037; Number of clusters is 12
Done. Run time: 0.476253986358643s
Clustering statistics
Cell counts by cluster
Maximal modularity is 0.89291159966731 for resolution parameter 5e-04
Run kNN based graph clustering DONE.
-Number of clusters: 12
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 12059 rows and 2 columns
-k is set to 20
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0480000000002292s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time: 0.00399999999990541s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE. Run time: 0.0610000000001492s
Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.001
leiden_find_partition: num_iter 10
leiden_find_partition: initial_membership 0
leiden_find_partition: edge_weights 0
leiden_find_partition: node_sizes 0
leiden_find_partition: number vertices 12059
leiden_find_partition: number edges 241180
Current resolution is 0.001; Modularity is 0.90927006471712; Quality is 462808.984; Significance is 413220.262079219; Number of clusters is 15
Done. Run time: 0.472654104232788s
Clustering statistics
Cell counts by cluster
Maximal modularity is 0.90927006471712 for resolution parameter 0.001
Run kNN based graph clustering DONE.
-Number of clusters: 15
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 12059 rows and 2 columns
-k is set to 20
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0489999999999782s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time: 0.00399999999990541s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE. Run time: 0.05600000000004s
Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.005
leiden_find_partition: num_iter 10
leiden_find_partition: initial_membership 0
leiden_find_partition: edge_weights 0
leiden_find_partition: node_sizes 0
leiden_find_partition: number vertices 12059
leiden_find_partition: number edges 241180
Current resolution is 0.005; Modularity is 0.928449098731827; Quality is 441389.33; Significance is 625299.349754509; Number of clusters is 41
Done. Run time: 0.464754104614258s
Clustering statistics
Cell counts by cluster
Maximal modularity is 0.928449098731827 for resolution parameter 0.005
Run kNN based graph clustering DONE.
-Number of clusters: 41
for(colID in colnames(colData(cds))){
if(grepl("umap_res", colID)){
cat("cluster count for", colID, ":", length(levels(unique(colData(cds)[,colID]))), "\n")
}
}
cluster count for umap_res_0.001 : 15
cluster count for umap_res_1e-04 : 6
cluster count for umap_res_5e-04 : 12
cluster count for umap_res_0.005 : 41
saveRDS(cds, file = paste0(projectName, "-UMAP.RDS"))
cds <- readRDS(paste0(projectName, "-UMAP.RDS"))
for(colID in colnames(colData(cds))){
if(grepl("umap_res", colID)){
if(length(levels(colData(cds)[,colID])) <= length(color.palette)){
cluster_plot <- plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP",
color_cells_by = colID, show_trajectory_graph = FALSE,
cell_size = 1, group_label_size = 5, label_groups_by_cluster = FALSE) +
scale_color_manual(values = color.palette) +
ggtitle(paste0(projectName, "-", colID))
plot(cluster_plot)
} else {
cluster_plot <- plot_cells(cds = cds, reduction_method = "UMAP",
color_cells_by = colID, show_trajectory_graph = FALSE,
cell_size = 1, group_label_size = 5, label_groups_by_cluster = FALSE) +
ggtitle(paste0(projectName, "-", colID))
plot(cluster_plot)
}
# save plot
png(filename = paste0(projectName, "-", colID, ".png"), height= 800, width = 800)
plot(cluster_plot)
dev.off()
}
}
# library(igraph)
# library(schex)
# library(scater)
# library(scran)
# library(ggrepel)
# # plot_hexbin_meta_shiny(cds, col = "RNA_snn_res.1", action = "majority", min_nbins = 20, max_nbins = 50, dimension_reduction = "UMAP", na.rm = TRUE)
For CMP, let’s start exploring with res = 0.001 # Find Marker Genes randomly guessing to set reference_cells value at 1000 (could also provide a list of cells if, e.g., wanted to specifiy an originating population)
marker_test_res <- top_markers(cds, group_cells_by = "umap_res_0.001", reference_cells = 1000, cores = 8)
| | 0%, ETA NA
| | 0%, ETA 01:05
| | 0%, ETA 00:41
| | 0%, ETA 00:33
| | 0%, ETA 00:20
| | 0%, ETA 00:16
| | 0%, ETA 00:12
| | 0%, ETA 00:12
| | 0%, ETA 00:09
| | 0%, ETA 00:07
| | 0%, ETA 00:07
| | 0%, ETA 00:06
| | 0%, ETA 00:05
| | 0%, ETA 00:05
| | 0%, ETA 00:05
| | 0%, ETA 00:04
| | 0%, ETA 00:04
| | 0%, ETA 00:04
| | 0%, ETA 00:04
| | 0%, ETA 00:04
| | 0%, ETA 00:04
|= | 0%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:03
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|= | 1%, ETA 00:02
|== | 1%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|== | 2%, ETA 00:02
|=== | 2%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|=== | 3%, ETA 00:02
|==== | 3%, ETA 00:02
|==== | 3%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|==== | 4%, ETA 00:02
|===== | 4%, ETA 00:02
|===== | 4%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|===== | 5%, ETA 00:02
|====== | 5%, ETA 00:02
|====== | 5%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|====== | 6%, ETA 00:02
|======= | 6%, ETA 00:02
|======= | 6%, ETA 00:02
|======= | 6%, ETA 00:02
|======= | 6%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======= | 7%, ETA 00:02
|======== | 7%, ETA 00:02
|======== | 7%, ETA 00:02
|======== | 7%, ETA 00:02
|======== | 7%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|======== | 8%, ETA 00:02
|========= | 8%, ETA 00:02
|========= | 8%, ETA 00:02
|========= | 8%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========= | 9%, ETA 00:02
|========== | 9%, ETA 00:02
|========== | 9%, ETA 00:02
|========== | 9%, ETA 00:02
|========== | 9%, ETA 00:02
|========== | 9%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
|========== | 10%, ETA 00:02
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|============================================================================================= | 91%, ETA 00:01
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|=============================================================================================== | 93%, ETA 00:01
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|==================================================================================================== | 98%, ETA 00:00
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|===================================================================================================== | 99%, ETA 00:00
|===================================================================================================== | 99%, ETA 00:00
|======================================================================================================| 100%, ETA 00:00
|==================================================================================================| 100%, Elapsed 00:11
rowData(cds)$gene_short_name <- row.names(rowData(cds))
marker_test_res
KEY: a data.frame where the rows are genes and the columns are
* gene_id vector of gene names * gene_short_name vector of gene short names * cell_group character vector of the cell group to which the cell belongs * marker_score numeric vector of marker scores as the fraction expressing scaled by the specificity. The value ranges from 0 to 1. * mean_expression numeric vector of mean normalized expression of the gene in the cell group * fraction_expressing numeric vector of fraction of cells expressing the gene within the cell group * specificity numeric vector of a measure of how specific the gene’s expression is to the cell group based on the Jensen-Shannon divergence. The value ranges from 0 to 1. * pseudo_R2 numeric vector of pseudo R-squared values, a measure of how well the gene expression model fits the categorical data relative to the null model. The value ranges from 0 to 1. * marker_test_p_value numeric vector of likelihood ratio p-values * marker_test_q_value numeric vector of likelihood ratio q-values
top_pseudoR2_markers <- marker_test_res %>%
filter(fraction_expressing >= 0.10) %>%
group_by(cell_group) %>%
top_n(3, pseudo_R2)
top_pseudoR2_markers <- unique(top_pseudoR2_markers %>% pull(gene_id))
my_plot <- plot_genes_by_group(cds, top_pseudoR2_markers, group_cells_by = "umap_res_0.001", ordering_type = "maximal_on_diag", max.size = 10)
Warning in if (axis_order == "marker_group") { :
the condition has length > 1 and only the first element will be used
plot(my_plot)
png(filename = paste0(projectName, "-map_res_0.001", "-pseudoR2markers.png"), height = 1200, width = 800)
plot(my_plot)
dev.off()
quartz_off_screen
2
# Require that markers have at least JS specificty score > 0.5 and
# be significant in the logistic test for identifying their cell type:
garnett_markers <- marker_test_res %>%
filter(marker_test_q_value < 0.01 & specificity >= 0.5) %>%
group_by(cell_group) %>%
top_n(5, marker_score)
# Exclude genes that are good markers for more than one cell type:
garnett_markers <- garnett_markers %>%
group_by(gene_short_name) %>%
filter(n() == 1)
# Generate garnett marker file
generate_garnett_marker_file(garnett_markers, file = paste0(projectName, "-garnettMarkers.txt"))
Garnett marker file written to CMPSubpop_monocle-garnettMarkers.txt
__Note that this file can be manually modified to add/remove classifier markers Abandoning this! 1) I’m getting distracted and 2) Will have to play with resolution to get marker genes for more than 3 clusters
First make sure correct resolution is represented in cluster slot
cds <- cluster_cells(cds = cds,
reduction_method = "UMAP",
k = n.neighbors,
cluster_method = "leiden",
resolution = 0.001,
num_iter = 10,
random_seed = seed.value,
verbose = TRUE)
Running leiden clustering algorithm ...
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 12059 rows and 2 columns
-k is set to 20
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0860000000002401s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time: 0.00700000000006185s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE. Run time: 0.114000000000033s
Run leiden clustering ...
leiden_find_partition: partition_type CPMVertexPartition
leiden_find_partition: seed 10
leiden_find_partition: resolution_parameter 0.001
leiden_find_partition: num_iter 10
leiden_find_partition: initial_membership 0
leiden_find_partition: edge_weights 0
leiden_find_partition: node_sizes 0
leiden_find_partition: number vertices 12059
leiden_find_partition: number edges 241180
Current resolution is 0.001; Modularity is 0.90927006471712; Quality is 462808.984; Significance is 413220.262079219; Number of clusters is 15
Done. Run time: 0.482103109359741s
Clustering statistics
Cell counts by cluster
Maximal modularity is 0.90927006471712 for resolution parameter 0.001
Run kNN based graph clustering DONE.
-Number of clusters: 15
Fit principal graph. Set use_partition = TRUE to not require all cells be connected on a single graph
cds <- learn_graph(cds, use_partition = TRUE, verbose = TRUE)
Processing partition component 1
Current partition is 1
Using 853 nodes for principal graph
Finding kNN using RANN with 25 neighbors
Calculating the local density for each sample based on kNNs ...
iter = 1 obj = 130.223386401442
iter = 2 obj = 109.625949981088
iter = 3 obj = 106.2922795642
iter = 4 obj = 105.132713094611
iter = 5 obj = 104.528117043417
iter = 6 obj = 103.965088734642
iter = 7 obj = 103.664900375243
iter = 8 obj = 103.397710415399
iter = 9 obj = 103.237145490188
iter = 10 obj = 103.111244051499
eps = 0.00121953622497916 reach maxiter.
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 11545 rows and 2 columns
-k is set to 25
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.0579999999999927s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time:0.00500000000010914s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE ~0.06899999999996s
Run louvain clustering on the graph ...
Running louvain iteration 1 ...
Maximal modularity is 0.917550960826082; corresponding resolution is No resolution
Run kNN based graph clustering DONE, totally takes 0.37037205696106 s.
-Number of clusters: 31
|
| | 0%
|
|==================================================================================================================================| 100%
Running graph pruning ...
Processing partition component 2
Current partition is 2
Using 41 nodes for principal graph
Finding kNN using RANN with 25 neighbors
Calculating the local density for each sample based on kNNs ...
iter = 1 obj = 0.381509156802649
iter = 2 obj = -0.122641652694875
iter = 3 obj = -0.220671093279736
iter = 4 obj = -0.251939077317561
iter = 5 obj = -0.26629095473749
iter = 6 obj = -0.276282567564283
iter = 7 obj = -0.281598233966818
iter = 8 obj = -0.285065852930487
iter = 9 obj = -0.287594604615971
iter = 10 obj = -0.289553992025698
eps = 0.00681301866682352 reach maxiter.
Run kNN based graph clustering starts:
-Input data of 514 rows and 2 columns
-k is set to 25
Finding nearest neighbors...
DONE. Run time: 0.00300000000015643s
Compute jaccard coefficient between nearest-neighbor sets ...
DONE. Run time:0s
Build undirected graph from the weighted links ...
DONE ~0.00299999999970169s
Run louvain clustering on the graph ...
Running louvain iteration 1 ...
Maximal modularity is 0.744597171796696; corresponding resolution is No resolution
Run kNN based graph clustering DONE, totally takes 0.0229921340942383 s.
-Number of clusters: 8
|
| | 0%
|
|==================================================================================================================================| 100%
Running graph pruning ...
Projecting cells to principal points for partition: 1
Projecting cells to principal points for partition: 2
my_plot <- plot_cells(cds, reduction_method = "UMAP",
color_cells_by = "cluster",
label_groups_by_cluster = FALSE, label_leaves = FALSE, label_branch_points = TRUE,
cell_size = 1, group_label_size = 8, graph_label_size = 5) +
scale_color_manual(values = color.palette) +
ggtitle(paste0(projectName, "-umap_res0.001_psdtime"))
plot(my_plot)
png(filename = paste0(projectName, "-umap_res0.001_psdtime.png"), height = 800, width = 800)
plot(my_plot)
dev.off()
quartz_off_screen
2
Will need to complete msAggr to order cells. For example, will pick those CMP cells that cluster with LSK and “earliest” CMPs.